Effect of mutations of Thermoanaerobacter ethanolicus secondary alcohol dehydrogenase at tryptophan-110 on enantioselectivity of reduction of phenyl –ring-containing ketones

الموضوعات

علوم بحتة وطبيعية

الملخص

The asymmetric reduction of selected phenyl-ring-containing ketones by various mutants of Thermoanaerobacter ethanolicus secondary alcohol dehydrogenase (TeSADH) was studied using single and dual site mutagenesis. The expansion of both small and large pockets of TeSADH in the mutant W110A/I86A not only accommodates the substrates of single mutants W110A and I86A within the active site, but also expands the substrate scope to ketones bearing two sterically demanding groups (bulky-bulky ketones); which are not substrates for TeSADH single mutants. We also explored the regio- and enantioselective reduction of diketones using W110A/I86A TeSADH. The double mutant exhibited dual stereopreferences that resulted in Prelog products and the anti-Prelog products were occasionally observed. Kinetic parameters, Michaelis-Menten constant (Km) and maximum velocity (Vmax), for the reduction reactions of substituted 4-phenyl-2-butanone and 1-phenyl-2-propanone were consistent with that of the enantioselectivity values. Moreover, we conducted asymmetric reduction of substituted 2-tetralones, using various mutants of TeSADH which revealed that the stereoselectivity and its magnitude were dependent on the position of substituent on the aromatic ring; such an outcome has been attributed due to different binding modes of these substrates in the enzyme active site. In addition, changing the position of the substituent on the aromatic ring also has a great impact on the binding affinity and maximum catalytic rate, as reflected by the kinetic parameters Vmax and Km.

روابط وملفات

التعريف والنوع

رقم الوثيقة

0f1a7e9b-3937-4948-b89a-a8e09321c2bf

رقم العقد

0

نوع الوسائط

Crawler

نوع المحتوى

الرسائل العلمية

صيغة المصدر

رسائل ماجيستير

نوع الملف

pdf text

أسماء الملفات

848620_1.pdf

بيانات النشر

ترجمة العنوان

تأثير طفرات مختلفة من الانزيم (TeSADH) على موقع Trp110 على الاختزال غير المتماثل لمركبات الكيتون التي تحتوي على حلقة أروماتية

ألقاب المؤلفين

[{"name_ar":" Musa Musa","title_ar":"اشراف","title_en":"Supervision"},{"name_ar":"Odey Bsharat","title_ar":"اعداد","title_en":"Preparation"}]

اللغة

English

المصدر والدورية

اسم المصدر

Effect of mutations of Thermoanaerobacter ethanolicus secondary alcohol dehydrogenase at tryptophan-110 on enantioselectivity of reduction of phenyl –ring-containing ketones

المحتوى والصفحات

عدد الصفحات

0

ترجمة الملخص

تم تحضير مركبات الكحول من الاختزال غير المتماثل لمجموعة من مركبات الكيتون التي تحتوي على حلقة اروماتية باستخدام طفرات مختلفة من الانزيم (TeSADH). باستخدام الطفرة الثنائية للموقع النشط للانزيم تمكنا من اختزال جميع مركبات كيتون التي يمكن اختزالها بالطفرة الاحادية وكذلك تمكن من زيادة عدد مركبات الكيتون التي يمكن ان تختزل بواسطة الانزيم وخصوصا مركبات الكيتون التي تحتوي على مجموعات اروماتية حول الكاربونيل. كذلك تمكنا من اختزال مركبات كيتون التي تحتوي على مجموعتين كاربونيل بفعالية عالية. تم قياس المعاملات الحركية (Vmax and Km) لمركبات ٤- فينيل-٢ - بيوتانون و١- فينيل- ٢- بروبانون وكانت متوافقة مع قيم (ee) التي تم ايجادها. بالاضافة الى ذلك تم اجراء اختزال غير متماثل لمركبات (2-tetralones) ومشتقاتها ووجدنا ان هناك تاثير كبير لموقع مجموعة التفرع على الحلقة الاروماتية على نوع الكحول الناتج وتم قياس معاملات الحركية (Vmax and Km) لهذه المركبات.

كلمات الباحثين

Asymmetric reduction, enzyme mutants, cyclic ketones, stereoselectivity, enzyme kinetics.

إشراف وإعداد

الإشراف

Musa Musa

الإعداد

Odey Bsharat

الاقتباسات الببليوغرافية