Effect of physical and chemical mutagens on Staphylococcus aureus cell wall

الموضوعات

علوم بحتة وطبيعية

الملخص

This study aimed to modify Staphylococcus aureus by using physical and chemical mutagens and subjections the cell wall to the hydrolytic activity of lysozyme. Chemical mutagenesis by N-methyle-N-nitro-N-nitroguanidine, was achieved by incubating the cell suspension of Staphylococcus aureus with 100μg/ml MNNG for different periods of time (5, 10, 15, 20, 25 and 30min).Aliquot of 100μl of the bacterial suspension subjected to the lethal and mutagenic effect of MNNG, then spread on BHI agar and incubated at 37°C over night in dark. After incubation, 180 colonies were randomly selected and screened for their ability to grow on the same medium supplemented with 3.4 and 12.5μg/ml lysozyme to detect the lysozyme sensitive mutants. Results showed that all of the selected colonies were able to grow on 12.5μg/ml lysozyme containing medium except one colony (S1). Physical mutagenesis by UV radiation was achieved by subjecting cell suspension of S. aureus to different doses of UV radiation (1, 2, 3, 4 and 5J/m2).Aliquot of 100μl of the bacterial suspension was exposed to the lethal and mutagenic effect of UV radiation then spread on BHI agar and incubated at 37°C over night in dark. After incubation, 160 colonies were randomly selected and screened for their ability to grow on the same medium but containing 3.4 and 12.5μg/ml lysozyme. Results showed that all of the selected colonies were able to grow on these media except four colonies (S2, S3, S4, and S5) which were unable to grow on 12.5μg/ml lysozyme containing medium, these four colonies were considered to be lysozyme sensitive mutants.

روابط وملفات

التعريف والنوع

رقم الوثيقة

fffc157f-3cff-4a06-8617-4f928fc47bae

رقم العقد

0

نوع الوسائط

Crawler

نوع المحتوى

الرسائل العلمية

صيغة المصدر

رسائل ماجيستير

نوع الملف

pdf text

أسماء الملفات

14979_1.pdf

بيانات النشر

ترجمة العنوان

تأثير المطفرات الكيميائية والفيزيائية على تركيب الجدار الخلوي لبكتريا Staphylococcus aureus

ألقاب المؤلفين

[{"name_ar":"حميد محمد الدليمي","title_ar":"اشراف","title_en":"Supervision"},{"name_ar":"عبد الكريم القزاز","title_ar":"اشراف","title_en":"Supervision"},{"name_ar":"فرح طارق عبد الكريم","title_ar":"اعداد","title_en":"Preparation"}]

اللغة

English

المصدر والدورية

اسم المصدر

Effect of physical and chemical mutagens on Staphylococcus aureus cell wall

المحتوى والصفحات

عدد الصفحات

0

ترجمة الملخص

هدفت هذه الدراسه الى تحوير الجدار الخلوي لبكتريا aureus Staphylococcus باستخدام المطفرات الكيميائيه والفيزيائيه يجعل الجدار الخلوي قابل للتحلل بفعل انزيم اللايسوزايم. أجريت عملية التطفير الكيميائي بمادة النايتروسوآواندين (MNNG (وذلك بحضن عالق بكتريا aureus. Sمع المطفر (MNNG (بترآيز ١٠٠ مايكروغرام/مل لفترات زمنيه مختلفه (٥ ،١٠ ،١٥ ،٢٠ ،٢٥ و٣٠ دقيقه)، نشر بعدها ١٠٠ مايكرولتر من عالق الخلايا المعرضه للتأثير القاتل والمطفر لهذه الماده على وسط نقيع الدماغ المتصلب بمادة الاآار وحضنت بدرجة حرارة ٣٧ م لمدة ٢٤ ساعة في الظلام ، تم بعدها الأنتقاء العشوائي لــ ١٨٠ مستعمره من المستعمرات الناميه على الوسط وغربلة قابليتها على النمو في نفس الوسط الحاوي على اللايسوزايم بترآيز ١٢٫٥ مايكروغرام/مل للتحري عن الطافرات البكتيرية الحساسة لللايسوزايم ، وقد تمكنت جميع المستعمرات البكتيريه من النمو في الوسط بأستثناء مستعمره واحدة رمز لها S1عدت حساسه للايسوزايم. أجريت عملية التطفير الفيزيائي بأستخدام الاشعه فوق البنفسجيه وذلك بتعريض عالق بكتريا aureus. S الى جرعات مختلفه من هذه الاشعه (١ ،٢ ،٣ ،٤ و٥ جول/م )، نشر بعدها ١٠٠ ٢ مايكرولتر من عالق الخلايا المعرضه للتأثير القاتل والمطفر للأشعه على وسط نقيع القلب الدماغ المتصلب بمادة الاآار وحضنت بدرجة حرارة ٣٧ م لمدة ٢٤ ساعة في الظلام ، تم بعدها الأنتقاء العشوائي لــ ١٦٠ مستعمره من المستعمرات الناميه على الوسط وغربلة قابليتها على النمو في نفس الوسط الحاوي على اللايسوزايم بترآيز 4.3 و ١٢٫٥ مايكروغرام/مل للتحري عن الطافرات البكتيرية الحساسة لللايسوزايم ، وقد أشارت النتائج الى أن جميع المستعمرات البكتيريه الناتجه من النمو في الوسط بأستثناء اربعة مستعمرات رمز لها S2, S3, S4 ,S5 عدت حساسه للايسوزايم. درس النسق البلازميدي لبكتريا aureus. S النوع البري والطافرات البكتريه ,S1,S2,S3 S4 , S5 الناتجة من التطفير الكيميائي والفيزيائي وذلك بأستخلاص الدنا البلازميدي بطريقة التحلل القاعدي بأستخدام اللايسوزايم بدلا عن اللايسوستافين المعروف بفعاليته الحاله لجدار بكتريا aureus .Sوقد اشارت النتائج الى ظهور حزمه بلازميديه واحده فضلا عن الحزمه الكروموسوميه في آل من هذه الطافرات البكتيريه S1, S2, S3, S4, S5 في حين لم تتمكن الطريقه من استخلاص الدنا البلازميدي من النوع البري وذلك لمقاومة جدارها الخلوي لأنزيم اللايسوزايم ، مما يعد دليلا على حدوث الطفرات في الجينات الترآيبيه المسؤوله عن بناء الجدار الخلوي. درس التأثير التآزري لكل من البنسلين واللايسوزيم على بكتريا aureus. S حيث أشارت النتائج الى ان حضن البكتريا مع الترآيز المثبط الادنى للبنسلين (MIC (بترآيز ٦٤٠ وحده/مل لفترات زمنيه مختلفه (٢ ،٣ ،٤ ،٥ ساعه) و لمدة ساعتين مع انزيم اللايسوزام بترآيز ٢٥0 مايكروغرام/مل أدى الى حدوث التحلل التدريجي للجدار الخلوي بعد اضافة اللايسوزايم وذلك من خلال نشوء الخلايا المنزوعة الجدار (البروتوبلاست) ،ثم التحلل التام بزيادة فترة الحضن. تم التحري عن النسق البلازميدي لهذه الخلايا بتحليل جدرانها الخلويه بطريقة التحلل القاعدي بأستخدام اللايسوزايم بدلا من اللايسوستافين ، وقد أشارت النتائج ايضا الى ظهور حزمة بلازميديه وآروموسوميه واحده على هلام الأآاروز بترآيز٠٫٧ .% شخصت الطافرات الحساسة لانزيم اللايسوزايم الناتجه بعد تعريض aureus. S لتأثير المطفرات الكيميائيه و الفيزيائيه (النايتروسوآواندين والاشعه فوق البنفسجيه) وتم مقارنة النتائج مع النوع البري. بعدها ذلك درس نمط المقاومة لمضادات الحياة للطافرات البكتيريه الخمسه الناتجه عن التطفير الكيميائي والفيزيائي وقد اشارت النتائج الى ظهور تغاير في نمط مقاومة المضادات لــخمسة مضادات حيويه من المضادات المستخدمه في هذه الدراسه بالمقارنة مع النوع البري، وذلك لأمكانية حدوث الطفرات الوراثيه في الجينات المسؤوله عن صفات المقاومة لمضادات الحياة بعد تعرضها للتطفير الكيميائي والفيزيائي. آما وتمت دارسة امكانية تحلل الجدار الخلوي لطافرات بكتريا aureus. S بعد اضافة اللايسوزايم (٥٠ مايكرغرام/مل) الى العالق البكتيري و اظهرت النتائج بعد فحص الخلايا بواسطة المجهر الضوئي نشوء خلايا منزوعة الجدار (البروتوبلاست) بعد ساعتين فقط من الحضن مما يؤآد على امكانية الحصول على البروتوبلاست من الخلايا المطفره خلافا للنوع البري حيث يتطلب تحلل جداره الخلوي الى فترات طويله من الحضن مع البنسلين وترآيز اعلى من انزيم اللايسوزايم. ولغرض التعرف على التغيرات الحاصله في ظروف النمو للطافرات الناتجه عن التطفير الكيمائي والفيزيائي بالمقارنه مع النوع البري ، تم حضن النوع البري و الطافرات في درجات حراريه مختلفه (٣٠ ،٣٧ ،٤٠ ،٤٣ ،٤٥ م) وقد اظهرت النتائج ان بعض العزلات الطافره غير قادره على النمو في درجات الحراره العالية ( ٤٣،٤٥ م ) خلافا للنوع البري الذي اظهر نموا ،مما يؤآد على حساسية هذه الطفرات للنمو في درجات الحراره العاليه.

إشراف وإعداد

الإشراف

حميد محمد الدليمي, عبد الكريم القزاز

الإعداد

فرح طارق عبد الكريم

الاقتباسات الببليوغرافية