Molecular genetic study of leukemia patients. +CD

الموضوعات

علوم بحتة وطبيعية

الملخص

The present work comprised molecular genetic analysis of four types of leukemia, Acute Lymphoid leukemia (ALL), Acute Myeloid Leukemia (AML), Chronic Lymphoid Leukemia (CLL) and Chronic Myeloid Leukemia (CML). Samples of blood were obtained from 65 Syrian patients affected with one of the four types of leukemia, admitted to Al-Bairuni University Hospital and Al-Assad University Hospital. The Wizard Promega kit was found suitable for DNA isolation from leukemia patients and normal individuals. By this method suitable quantities of DNA approximately (100 – 600 µg) were obtained from 300 µl of whole blood. The purity of isolated DNA ranged from (1.7 - 1.9). However only 45 patients of the total number of leukemia cases gave good yield of DNA. The rest of cases were distributed between ten cases showed clotted blood, and ten cases showed low W.B.C count with low DNA yield. RAPD-PCR analysis was carried out with 22 different arbitrary primers of decamer oligonucleotides. These primers were evaluated for their usefulness in detecting DNA polymorphism among leukemia patients. The study Chapter Three Results and Discussion involved optimization for RAPD reaction for DNA template, primer concentration and run program. The obtained results were as following : A- Thirteen primers showed no amplified products in all normal individuals and leukemia patients. B- Nine primers amplified genomic DNA in the normal individuals and leukemia patients with different efficiencies. The generated DNA fragments (when using these primers) were scored by their presence or absence and the differences in their molecular weight across the normal individuals and leukemia patients. The total number of amplified bands generally ranged between (1 - 15) and the molecular weights varied between (95 – 3162) bp according to the primer used. The minimum number of amplified bands was one band which was observed when using primers OPB-18 and OPZ02; on the other hand the highest number of bands were (15) bands which were observed when using primer OPJ-05. The lowest molecular weight of amplified band was 95 bp which was obtained with primers OPB-15 and OPJ-05, and the highest molecular weight of amplified band was 3162 bp which was obtained with primer OPA-09. C- In addition it was possible to observe decrease or increase in the relative intensities of the bands amplified from the genomic DNA of leukemia patients as compared with normal DNA. D- Among the leukemia patients tested, 37.8% of patients showed the highest DNA polymorphism because they were detected by nine Chapter Three Results and Discussion primers used in this study. 48.8% of patients were detected by eight primers, 8.9% of patients were detected by seven primers and 4.5% of patients were detected by six primers. E- The ability to detect genetic alteration by each primer was variable, the highest value of efficiency was shown by primer OPB-17 (0.059), whereas primer OPE-05 showed the lowest value (0.016). F- The study had shown that genetic instabilities were frequent in genomic DNA of leukemia patients and could be detected by using suitable RAPD primers, e.g. primer OPA-09 could be used as a marker for detection of ALL and CLL patients. Primers OPB-17 and OPW-17 gave a specific band in all AML patients which was absent in normal individuals and other leukemia patients. On other hand, primer OPW-17 gave another specific band in AML and CLL patients, while, it was absent in normal individuals and other leukemia patients. Whereas, primers OPB15 and OPW-17 showed another specific band which was present in normal individuals and in other leukemia patients, but was lost in AML patients. The result of primer OPZ-02 showed a specific band was present in normal individuals, and in all leukemia patients, however in CML patients was lost . G- Primer OPJ-05 could amplify specific band in normal male individuals but it could not amplify this band in normal female individuals. Chapter Three Results and Discussion 65 RAPD-PCR analysis was applied to investigate polymorphism in DNA methylation of CML leukemia patients and normal individuals. The results of digested genomic DNA with HpaII and MspI showed clear differences in the methylation of the genomic DNA of the CML patients and normal individuals, suggesting variation in the proportion and pattern of methylated and unmethylated CGs. The results revealed differences in banding patterns which include: banding shifts , missing bands and / or banding intensity changes

روابط وملفات

التعريف والنوع

رقم الوثيقة

f4577470-63f3-439c-9b87-449d7d91e051

رقم العقد

0

نوع الوسائط

Crawler

نوع المحتوى

الرسائل العلمية

صيغة المصدر

رسائل ماجيستير

نوع الملف

pdf text

أسماء الملفات

16653_1.pdf

بيانات النشر

ترجمة العنوان

دراسة وراثية جزيئية لمرضى أبيضاض الدم

ألقاب المؤلفين

[{"name_ar":" محمد أ. إبراهيم","title_ar":"اشراف","title_en":"Supervision"},{"name_ar":" نهى محمد صالح شبيب ","title_ar":"اعداد","title_en":"Preparation"},{"name_ar":"اسماعيل الاروكية","title_ar":"اشراف","title_en":"Supervision"}]

اللغة

English

المصدر والدورية

اسم المصدر

Molecular genetic study of leukemia patients. +CD

المحتوى والصفحات

عدد الصفحات

0

ترجمة الملخص

تضمن البحث اجراء دراسة وراثية جزيئية لمرضى ابيضاض الدم بأنواعه الأربعة (ابيضاض الدم اللمفوي الحاد, ابيضاض الدم النخاعي الحاد, ابيضاض الدم اللمفاوي المزمن وابيضاض الدم النخاعي المزمن). إذ أجريت فحوصات الوراثة الجزيئية لـ 65 مريضا انحدروا من مناطق جغرافية مختلفة من سوريا تمت أحالتهم الى مستشفى البيروني الجامعي ومستشفى الأسد الجامعي و شخصت إصابتهم بالمرض بأستخدام الفحص السريري للدم ونخاع العظم. أوضحت النتائج أن كميات الدنا المعزول من الأشخاص الطبيعيين ولمرضى ابيضاض تترواح بين (100 -600 (مايكروغرام لكل 300 مليليتر وبنقاوة تتراوح بين (7,1-9,1 (عند أستعمال العدة المجهزة من شركة Promega وفي حالة أستخلاص الدنا بطريقة ,Russell and Sambrook 2001 تم الحصول على أقل من 100 مايكروغرام لكل مليلتر وبنقاوة <0.1 .ومن جانب أخر أوضحت النتائج من أن 45 مريضا فقط من مجموع المرضى اعطوا كميات دنا جيدة. اما بقية الحالات التي لم تعطي كميات جيدة من الدنا فقد توزعت ما بين 10 حالات دم متخثر و10 حالات تميزت بأنخفاض تعداد كريات الدم البيض. في هذه الدراسة استخدم اثنان وعشرون بادئأً لتقييمها في الكشف عن التغاييرات الوراثية على مستوى الدنا بين الاشخاص الطبيعيين والمرضى. وهدفت التجارب في بداية الامر الى تحديد الظروف المثلى لتفاعلات ال (PCR-RAPD (كتركيز قالب الدنا والبادئات وبرنامج التضاعف وغيرها وكانت النتائج كالتالي: أ- أن ثلاثة عشر باديئ لم تعطي نواتج تضاعف في كل الطرز الوراثية للأشخاص الطبيعيين وكذلك لمرضى ابيضاض الدم تبين أن تسعة بادئات كانت لها قدرة متباينة في تضاعف حزم الدنا ضمن الاشخاص الطبيعيين والمرضى. وأوضحت النتائج وجود تباينات في الدنا المجيني بين مرضى ابيضاض الدم بالمقارنة مع الاشخاص الطبيعيين المشمولين بهذه الدراسة. وقد شملت هذه التباينات اختلافات في عدد الحزم المتضاعفة من خلال وجودها او غيابها او الاختلاف في الوزن الجزيئي ضمن الاشخاص الطبيعيين والمرضى حيث تباين العدد الكلي للحزم المضخمة ما بين (1 -15 (وأوزانها الجزيئية تراوحت بين (95 – 3162 (زوج قاعدة تبعا للباديء المستخدم. حيث لوحظت حزمة واحدة عند استخدام البادئات 02-OPZ ,18-OPB بينما ظهرت (15 (حزمة مع الباديء 05-OPJ .و لوحظ أن أقل حجم جزيئي كان 95 زوج قاعدة قد ظهر مع الباديء 05-OPJ, 15-OPB وان اعلى وزن جزيئي للقطع المتضاعفة كان 3162 زوج قاعدة بأستخدام الباديء 09-OPA. ت- لوحظ ايضا ان هناك تغيير في شدة تألق حزم الدنا لمرضى ابيضاض الدم بالمقارنة مع الاشخاص الطبيعيين. ث- بينت الدراسة من ان 8,37 %من بين مرضى ابيضاض الدم قد اظهروا اعلى نسبة تباينات في الدنا المجيني بالمقارنة مع الاشخاص الطبيعيين حيث حددت هذه التباينات في جميع البادئات المستخدمة في هذه الدراسة, حيث بلغت 8,48 %من المرضى بأستعمال ثمانية بادئات. و حددت التباينات في 9,8 %من المرضى في سبعة بادئات. وأخيرا حددت التباينات في 5,4 %من المرضى في ستة بادئات. ج- كما قيمت في هذه الدراسة ايضا مدى كفاءة البادئات المستخدمة في اظهار التباين الوراثي. حيث وجد ان أعلى قيمة للكفاءة تم استحصالها مع الباديء 17-OPB بقيمة (059,0 (وأن اقل قيمة للكفاءة كانت (016,0 (حيث تم الحصول عليها مع الباديء 05-OPE. ح- أظهرت الدراسة وجود تغييرات وراثية متكررة في الدنا المجيني لمرضى ابيضاض الدم ويمكن الكشف عنها باستخدام بادئات مناسبة في تقنية (PCR-RAPD ( ومثال على ذلك الباديء-OPA 09 اذ يمكن استخدامه في الكشف عن مرضى ابيضاض الدم المفاوي الحاد وابيضاض الدم اللمفاوي المزمن. والبادئان 17-OPB و 17-OPW كانت لهم القابلية على اظهار حزمة معينة موجودة في مرضى ابيضاض الدم النخاعي الحاد في حين لم تظهر هذه الحزمة في الاشخاص الطبيعيين ولا في بقية مرضى انواع ابيضاض الدم الاخرى. ومن جانب اخر اظهر الباديء 7-OPWالقابلية على اظهار حزمة معينة في مرضى ابيضاض الدم النخاعي الحاد ومرضى ابيضاض الدم اللمفاوي المزمن في حين لم تظهر هذه الحزمة في الاشخاص الطبيعيين ولا في بقية مرضى انواع ابيضاض الدم الاخرى. أما في حالة استخدام البادئان 17-OPB, 17-OPW فقد تم فقدان حزمة معينة في مرضى ابيضاض الدم النخاعي الحاد في حين تواجدت هذه الحزمة في الأشخاص الطبيعيين وبقية مرضى انواع ابيضاض الدم الاخرى. وكذلك ايضا اظهرت النتائج عند استخدام الباديء 02-OPZ انه تم فقدان حزمة معينة في مرضى ابيضاض الدم النخاعي المزمن في حين تواجدت هذه الحزمة في الأشخاص الطبيعيين وبقية مرضى انواع ابيضاض الدم الاخرى. خ- ومن الجدير بالملاحظة ان الباديء 05-OPJ كانت له القابلية على تضخيم حزمة معينه في الرجال الطبيعيين ولكن هذه الحزمة فقدت في الاناث الطبيعيين. استخدمت تقنية التضاعف العشوائي متعدد الاشكال ( PCR-RAPD ( للتحري عن التنوع الوراثي في طرز مثيلة الدنا المجيني المستخلص من دم مرضى ابيضاض الدم النخاعي المزمن و أشخاص طبيعيين لفئة الاربيعينيات العمرية. بينت نتائج التضاعف العشوائي متعدد الاشكال للدنا المجيني المهضوم بأنزيمات التقييد الخاصة بالكشف عن طرز المثيلة (II Hpa , MspI (وجود اختلافات في طرز مثيلة الدنا المجيني لمرضى ابيضاض الدم بالمقارنة مع الاشخاص الطبيعيين مما يشير الى وجود تنوع في طرز مثيلة المواقع الحساسة للمثيلة (CGs ،(و تم تحليل النتائج اعتماداً على الاختلافات في طرز الحزم المتضاعفة بفقدان الحزم او / و تغير في شدة تألق الحزم و تغير في الحجم الجزيئي للحزم .

إشراف وإعداد

الإشراف

محمد أ. إبراهيم, اسماعيل الاروكية

الإعداد

نهى محمد صالح شبيب

الاقتباسات الببليوغرافية