Toxigenicity and Immunogenicity of Citrobacter freundii Locally Isolates

الموضوعات

علوم تطبيقية وتكنولوجية

الملخص

This study included 422 child patients (202 male and 220 female). Two hundred eighty two stool sample and 140 urine samples were collected from children under six years of ages and 200 hospital environment samples were obtained. As well as additional 25urine and 25 stool samples were obtained from apparently healthy children matched in age and sex with study group as a control. Eleven (2.60%) Citrobacter freundii isolated were obtained from all clinical samples. eight bacteria isolated from stool samples (2.83%) and three (2.14%) from urine samples, whereas no C. freundii bacteria isolated from both control and hospital environment samples. Molecular detection for genes responsible for heat-stable (st, stI-h, stII andestA) and heat-labile (lt, ltI-hand ltA) enterotoxin and other virulence genes like verotoxin (stx) and Intimin (eae) were detected by PCR technique. The result showed that st1-h was the heat-stable enterotoxin gene which found in 7 isolates (63.63) % and ltA as a heat-labile enterotoxin gene in 5 isolates (45.45%). Other heat-stable and heat-labile enterotoxin, verotoxin and intimine genes could not be detected. The Suckling Mice Assay (SMA) was applied to the 11 isolates of C. freundii, only two gave positive results. While Rabbit ligated ileal loop assay RIL, only 4 of the bacterial (Al-Jamell, 2011)7 isolates gave a positive results. Enterotoxin was purified partially by using sephacryl-S200, and the molecular weight for (ST) was measured as 19953 Dalton. The optimum pH and temperature for activity of partially purified heat stable enterotoxin (PPET) were (8 and 20°C) respectively. LD50 of bacterial Suspension, crude enterotoxin and PPET in mice was 2.04 × 107cell/mouse, 66.6 μg/mouse and 46.2 μg/mouse respectively. The histopathological defects appeared in spleen, lung and kidney. C. freundii antigen were used in this study PPET. After the immunization period of experimental animal (rabbits) and humeral immune response parameters have been tested. The result showed that Ag dilution 1:2 appeared weak precipitate line between partially purified enterotoxin and its specific antisera, and the PPET neutralized and lost its activity by interaction with specific antisera. Thus, toxigenic and nontoxigenic isolates of C. freundii were proceed by molecular and bioassay together with study of and humoral antitoxic immunity.

روابط وملفات

التعريف والنوع

رقم الوثيقة

0896ab4a-0dab-4af5-bb20-e3372168c5e4

رقم العقد

0

نوع الوسائط

Crawler

نوع المحتوى

الرسائل العلمية

صيغة المصدر

رسائل دكتوراة

نوع الملف

pdf text

أسماء الملفات

1000812_1.pdf

بيانات النشر

ترجمة العنوان

الخصائص السمية والمناعية لعزول محلية من بكتريا Citrobacter freundii

ألقاب المؤلفين

[{"name_ar":"أزهار عمران الذهب","title_ar":"اشراف","title_en":"Supervision"},{"name_ar":"سلمان عزيز الجبوري","title_ar":"اشراف","title_en":"Supervision"},{"name_ar":"ضياء شنان عبد الكاظم الجميل","title_ar":"اعداد","title_en":"Preparation"}]

اللغة

English

المصدر والدورية

اسم المصدر

Toxigenicity and Immunogenicity of Citrobacter freundii Locally Isolates

المحتوى والصفحات

عدد الصفحات

0

ترجمة الملخص

جمع خلال هذه الدراسة 422 عينة تمثلت بـ (282 عينة براز و140 عينة إدرار) من الأطفال تحت سن السادسة والمصابين بالإسهال والتهاب المجاري البولية، كذلك 200 عينة من بيئة المستشفى بالإضافة إلى 50 عينة سيطرة (أشخاص أصحاء). جمعت هذه العينات من ثلاث مستشفيات في مدينة النجف (مستشفى الصدر التعليمي، مستشفى الحكيم، ومستشفى الزهراء للأمومة والأطفال) في الفترة ما بين تموز وتشرين الأول 2010. عُزل النوع Citrobacter freundii بواقع 11 عزلة (2.60%) من مجموع العينات، شملت ثمان عزلات من عينات البراز (2.83%) وثلاث عزلات من عينات الإدرار (2.14%)، ولم يُعزل من عينات بيئة المستشفى وعينات السيطرة. شُخصت العزلات وفق الاختبارات المظهرية والكيموحيوية وباستعمال نظام API 20 E. شملت الدراسة الجزيئية التحري عن الجينات المسؤولة عن إنتاج الذيفان المعوي الثابت بالحرارة (st, stI-h, stII, و estA) والذيفان المعوي غير الثابت بالحرارة (lt, ltI-h و ltA) والفيروتوكسين (stx) وجين الالتصاق (eae) باستخدام تقنية سلسلة تفاعل إنزيم البلمرة. حيث بينت النتائج أن stI-h كان الجين المسؤول عن إنتاج الذيفان المعوي الثابت بالحرارة في سبع عزلات (63.63%)، وltA عن الذيفان المعوي غير الثابت بالحرارة في خمس عزلات (45.45%)، في حين لم يتم تشخيص بقية جينات السموم المعوية والفيروتوكسين وجين الالتصاق. أُجري اختبار الفئران الرضيعة لجميع العزلات للتحري عن الذيفان الثابت بالحرارة، فكانت فقط عزلتين (18.18%) أعطت نتائج موجبة لهذا الاختبار. في حين عند استخدامه للتحري عن الذيفان غير الثابت بالحرارة، أعطت أربعة عزلات (36.36%) نتائج موجبة لهذا الاختبار. تم تنقية الذيفان المعوي تنقية جزئية باستخدام Sephacryl S-200 بتقنية كروموتوغرافيا الترشيح الهلامي، وباستخدام نفس الهلام تم تقدير الوزن الجزيئي للذيفان وكان 19953 دالتون، كذلك تم تقدير الأس الهيدروجيني ودرجة الحرارة المثلى لعمل الإنزيم حيث كانت (8 و20°م) على التوالي. شملت الدراسة الإمراضية تقدير الجرعة القاتلة لنصف العدد من الحيوانات المختبرية، والتي كانت للعالق الجرثومي 2.04×10⁷ خلية/فأر، وللمستخلص الخام 66.6 ميكروغرام/فأر، وللذيفان المنقى جزئياً 46.2 ميكروغرام/فأر. كذلك بينت الدراسة الإمراضية النسيجية للمعاملات الثلاثة أعلاه تأثيرات أمراضية على الطحال والرئة والكلية. تم استخدام الذيفان المعوي المنقى جزئياً من بكتيريا C. freundii لغرض الدراسة المناعية. بعد فترة التمنيع، تم دراسة بعض معايير المناعة الخلطية. أظهر التخفيف 1:2 من الذيفان الثابت بالحرارة المنقى جزئياً خط ترسيب ضعيف في الهلام عند التفاعل بين المستضد والمصل المضاد، وبين اختبار التعادل أن المصل المضاد يمتلك قابلية معادلة تأثير الذيفان المعوي المنقى جزئياً. ويتضح مما تقدم أن العزلات المنتجة للذيفانات المعوية وغير المنتجة لبكتيريا C. freundii تم تشخيصها محلياً على مستوى الطرازين المظهري والجيني، وكذلك تم دراسة تأثيراتها الإمراضية مع بعض معايير المناعة الخلطية للذيفان المعوي المنقى جزئياً.

كلمات الباحثين

Citrobacter freundii, Enterotoxin, Enterotoxin genes, Neonatal mice assay, Chromatography, Lethal dose, Humoral immunity

إشراف وإعداد

الإشراف

أزهار عمران الذهب, سلمان عزيز الجبوري

الإعداد

ضياء شنان عبد الكاظم الجميل

الاقتباسات الببليوغرافية